2026, Vol. 43文章信息
- 张喜伟, 李西歌, 王琰.
- ZHANG Xiwei, LI Xige, WANG Yan.
- 愈梗通瘀汤调节PI3K/AKT信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响
- Effects of Yugeng Tongyu Decoction on myocardial injury rats with acute myocardial infarction via regulating the PI3K/AKT signaling pathway
- 天津中医药, 2026, 43(9): 1185-1194
- Tianjin Journal of Traditional Chinese Medicine, 2026, 43(9): 1185-1194
- http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1672-1519.2026.09.13
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- 收稿日期: 2026-06-07
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2. 郑州市第七人民医院心内科，郑州 450000
急性心肌梗死（AMI）是因冠状动脉血流急剧减少或中断所致的心肌缺血性坏死。据统计，其全球患病率约为3%（美国心脏协会数据）[1]。尽管再灌注治疗等手段显著改善了AMI的预后，但在逆转已坏死心肌、抑制心室重构及降低主要不良心血管事件发生率等方面，仍面临严峻挑战 [2]。因此，深入探索AMI后的心肌保护机制，对于开发新型治疗策略具有重要意义。AMI后心肌损伤涉及炎症、免疫应答、细胞凋亡、自噬及线粒体功能障碍等多种病理生理过程，其中氧化应激与炎症反应是贯穿始终的核心环节 [3-6]。研究表明，AMI时心肌组织抗氧化能力显著下降，氧化应激水平急剧升高 [7]。Xie等 [8]学者证实，通过干预减轻氧化应激能有效缓解大鼠AMI后的心肌损伤。愈梗通瘀汤（YGTY）为治疗AMI的常用中药复方，由生晒参、大黄、川芎、黄芪等多味药材组成，具有活血化瘀、益气祛湿之功效 [9]。临床研究提示，YGTY能够抑制炎症反应、改善血流动力学、降低心肌损伤标志物，从而改善患者短期预后 [10]。然而，其对氧化应激、细胞凋亡中的影响及其具体作用机制尚未完全阐明。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路是调控细胞生存、增殖、代谢及炎症反应的关键通路，其在AMI后的心肌修复与损伤过程中扮演重要角色 [11]。现有研究表明，适度抑制过度激活的PI3K/AKT通路可减轻心肌细胞凋亡与氧化应激，进而改善心功能 [12]。YGTY的心肌保护作用是否与其对PI3K/AKT通路的调控有关，目前尚缺乏直接证据，基于此，本研究旨在通过动物实验，明确YGTY对AMI大鼠心肌损伤的改善作用，并重点探讨其是否通过调控PI3K/AKT信号通路发挥作用，以期为揭示该方剂的分子机制提供实验依据。
1 材料与方法 1.1 主要试剂YGTY方剂由生晒参、广藿香、黄芪、紫丹参、佩兰各15 g，当归、陈皮、半夏、延胡索、川芎各10 g，以及大黄6 g组成。其制备方法如下：取上述中药饮片，经两次水煎提取，合并滤液并浓缩干燥后粉碎成粉末。临用前，以生理盐水将药粉溶解并配制成0.6、1.2及2.4 g/mL的溶液供实验使用。
PI3K激活剂740 Y-P购自山东思科捷生物技术有限公司；肌钙蛋白I（cTnI）、肌钙蛋白T（cTnT）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、补体片断5a（C5a）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）ELISA试剂盒购自酶联生物；肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）ELISA试剂盒购自华美生物；超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒购自翌圣生物；丙二醛（MDA）检测试剂盒、活性氧（ROS）检测试剂盒购自碧云天生物；髓过氧化物酶（MPO）、分化簇68（CD68）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）一抗及二抗购自英国abcam公司；p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT一抗购自美国Thermo Fisher Scientific公司。
1.2 动物实验使用6~8周龄SPF级雄性SD大鼠，体质量180~200 g，购自上海实验动物研究中心，动物生产许可证号：SCXK（沪）2024-0005。大鼠饲养环境条件控制为温度23 ℃、湿度50%~70%，并提供大鼠维持饲料及自由饮水。本研究获得本院伦理委员会批准（批准号2025-075）。
1.3 大鼠造模及分组大鼠经1周适应性喂养后，建立左冠状动脉前降支结扎的AMI模型 [13]：术前禁食禁水12 h，随后通过腹腔注射1%戊巴比妥钠（60 mg/kg）进行麻醉。麻醉后，行气管插管并连接小动物呼吸机辅助通气（潮气量4 mL，呼吸比1∶2，频率90次/min）。于左胸心尖搏动最强处切开皮肤，钝性分离肌肉组织，经第4~5肋间开胸暴露心脏，使用6-0缝线结扎左冠状动脉前降支。随后逐层关胸，排出胸腔内气体，并缝合皮肤切口。术后待大鼠恢复自主呼吸后移至保温毯，苏醒后放回笼内常规饲养。为预防感染，造模后连续3 d腹腔注射庆大霉素（0.2 mL/d）。4周后，超声心动图显示大鼠左心室射血分数（LVEF） < 50%时，证实AMI造模成功 [14]。
将造模成功的90只大鼠随机分为模型（AMI）组、YGTY低、中、高剂量（YGTY-L、M、H）组、卡托普利（CPT）组、YGTY-H+ PI3K激活剂（740 Y-P）组，每组15只。此外，另设15只假手术（Sham）组作为对照，只穿线不结扎。YGTY-L、M、H组分别灌胃6、12（临床等效剂量）、24 g/kg YGTY，每日剂量分两次灌胃 [15]；CPT组灌胃20 mg/kg CPT，每日1次；YGTY-H+740 Y-P组在灌胃24 g/kg YGTY（每日剂量分两次灌胃）的同时，每日1次腹腔注射10 mg/kg 740 Y-P[16]；AMI组和Sham组则给予等体积的生理盐水（灌胃及腹腔注射），所有干预均持续4周。
1.4 心功能检测末次给药完成后，麻醉大鼠，将其固定于操作台，使用小动物专用超声成像系统进行经胸心脏超声检查。通过M型超声模式，在胸骨旁左心室长轴视窗下精确获取乳头肌水平的心室波形图。随后，利用机载分析软件或离线处理系统，于该波形图上测量左心室舒张末期内径（LVEDD）与左心室收缩末期内径（LVESD）。最终，系统将根据上述测值自动计算出LVEF与左心室短轴缩短率（LVFS）这两个核心心功能指标。
1.5 TTC染色每组随机抽取5只大鼠，安乐死后取心肌组织，迅速置于-20 ℃环境中冷冻20 min以利于切片。将切片放入浓度为2%的TTC溶液中，于37 ℃避光孵育20 min。经4%多聚甲醛固定24 h后，对切片进行图像采集，并使用Image J软件进行分析。
1.6 心肌组织的HE和Masson染色每组随机选择5只大鼠，安乐死后分离心肌组织，将其浸入4% 多聚甲醛溶液中固定，石蜡包埋后制备成5 μm厚度的切片。切片经脱蜡复水处理后，采用HE染色法进行染色，并通过奥林巴斯光学显微镜采集图像。心肌组织炎症评分参照既往文献方法[6]进行，其评分标准具体如下：0分表示无炎症细胞浸润；1分表示炎症细胞浸润范围 < 5%；2分表示10%≥浸润范围≥5%；3分表示25%≥浸润范围≥10%；4分表示浸润范围 > 25%。
取部分石蜡切片，脱蜡水化后进行Masson 3色染色。使用尼康Eclipse显微镜（日本尼康）采集图像，并通过NIS Elements（尼康）软件进行分析。采用Image J软件分析胶原体积分数（CVF），计算公式为纤维化面积/心肌总面积。
1.7 ELISA末次给药结束后，麻醉所有大鼠，经腹主动脉取血，3 000 r/min，4 ℃下离心15 min分离血清，离心半径12 cm。血清中心肌损伤标志物cTnI、cTnT、CK-MB的含量采用ELISA试剂盒，按照制造商的说明进行检测。ELISA法检测每组剩余5只大鼠心肌组织中趋化因子ICAM-1、C5a、MMP-9及炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平。
1.8 TUNEL染色将1.6制备的部分心肌切片与TUNEL反应混合液孵育后标记凋亡细胞，然后用DAPI染色确定心肌细胞总数。在激光共聚焦显微镜（德国徕卡）下观察切片并拍照。
1.9 免疫组织化学染色取1.6制备的部分石蜡切片，经过脱蜡和水化处理后用4%的多聚甲醛固定，烘烤后进行柠檬酸缓冲液抗原复原，再进行脱蜡和水化处理。用5%的牛血清白蛋白进行抗原复原后，切片用兔抗MPO、CD68抗体进行初次抗体孵育，随后用辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗在4 ℃下孵育过夜。切片用二氨基联苯胺染色，用苏木精进行复染并冲洗，脱水、透明处理，然后封片以供显微镜观察。
1.10 氧化应激指标检测取适量心肌组织匀浆，采用羟胺法测定SOD活性，并通过硫代巴比妥酸法测定MDA含量。最后，使用分光光度计在相应波长下测定吸光度值，并根据标准曲线计算最终浓度。
取每组剩余5只大鼠的心肌组织，制成冰冻切片，切片用20 nmol/L的二氢乙锭（DHE）在37 ℃下染色15 min。在激光共聚焦显微镜（德国徕卡）下，以488/610 nm的激发/发射波长观察并拍摄切片。
1.11 Western blot使用放射免疫沉淀测定裂解缓冲液从心肌组织中提取总蛋白质，历时30 min。采用BCA法测定蛋白质浓度。将等量蛋白样品通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，转印至0.45 μm聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，并在室温下用5%脱脂牛奶封闭1 h。随后，将印迹膜与指定的一抗在4 ℃下孵育过夜：抗Bcl-2、抗Bax、抗pPI3K、抗PI3K、抗p-AKT、抗AKT。以GAPDH作为样本间比对的内参基因。次日，PVDF膜与辣根过氧化物酶标记的二抗在室温下孵育1 h。最后采用增强化学发光检测试剂扫描PVDF膜，并通过Image J软件分析特定分子条带强度。
1.12 统计学方法所有数据均以均数±标准差（x±s）的形式呈现。不同组间比较的统计分析采用单因素方差分析和Tukey’s检验。P < 0.05为差异具有统计学意义。所有分析均使用GraphPad Prism 9.0进行。
2 结果 2.1 YGTY对AMI大鼠心功能的影响与Sham组比较，AMI组LVEDD、LVESD升高，LVEF、LVFS降低（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组LVEDD、LVESD降低，LVEF、LVFS升高（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组LVEDD、LVESD升高，LVEF、LVFS降低（P < 0.05），见表 1。
| 组别 | 动物数 | LVEDD(mm) | LVESD(mm) | LVEF(%) | LVFS(%) |
| Sham组 | 15 | 5.65±0.31 | 3.73±0.32 | 70.32±5.63 | 33.63±3.15 |
| AMI组 | 15 | 7.52±0.29* | 6.12±0.51* | 41.26±4.07* | 18.62±2.01* |
| YGTY-L组 | 15 | 7.03±0.42# | 5.46±0.48# | 49.59±4.35# | 22.33±2.17# |
| YGTY-M组 | 15 | ||||
| YGTY-H组 | 15 | ||||
| CPT组 | 15 | ||||
| YGTY-H+740 Y-P组 | 15 | 7.41±0.36∇ | 5.95±0.52∇ | 43.51±4.16∇ | 19.70±1.59∇ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | |||||
与Sham组比较，AMI组梗死面积升高（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组梗死面积降低（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组梗死面积升高（P < 0.05），见图 1、表 2。
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| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。 图 1 各组大鼠TTC染色图 Fig. 1 TTC staining images of rats in each group |
| 组别 | 动物数 | 梗死面积(%) |
| Sham组 | 5 | 0 |
| AMI组 | 5 | 29.63±3.01* |
| YGTY-L组 | 5 | 23.56±2.32# |
| YGTY-M组 | 5 | |
| YGTY-H组 | 5 | |
| CPT组 | 5 | |
| YGTY-H+740 Y-P组 | 5 | 28.32±2.37∇ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | ||
HE和Masson染色结果显示，Sham组的心肌组织结构完整，心肌纤维排列整齐，无炎症细胞浸润，也无细胞坏死；同时仅沉积少量胶原蛋白。相比之下，AMI组表现出心肌纤维紊乱，纤维松弛断裂，伴有明显的心肌细胞肥大以及大量炎症性细胞浸润和细胞坏死；同时心肌组织中沉积了大量蓝色胶原纤维。与Sham组比较，AMI组炎症评分及CVF升高（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组炎症评分及CVF降低（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组炎症评分及CVF升高（P < 0.05），见图 2、表 3。
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| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。 图 2 各组大鼠HE和Masson染色图（×200） Fig. 2 HE and Masson staining images of rats in each group (×200) |
| 组别 | 动物数 | 炎症评分(分) | CVF(%) |
| Sham组 | 5 | 0.23±0.03 | 2.85±0.25 |
| AMI组 | 5 | 2.61±0.22* | 13.62±1.17* |
| YGTY-L组 | 5 | 2.22±0.21# | 10.23±0.89# |
| YGTY-M组 | 5 | ||
| YGTY-H组 | 5 | ||
| CPT组 | 5 | ||
| YGTY-H+740 Y-P组 | 5 | 2.48±0.20∇ | 11.34±1.02∇ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | |||
与Sham组比较，AMI组cTnI、cTnT、CK-MB水平升高（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组cTnI、cTnT、CK-MB水平降低（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组cTnI、cTnT、CK-MB水平升高（P < 0.05），见表 4。
| 组别 | 动物数 | cTnI (pg/mL) | cTnT (pg/mL) | CK-MB (ng/mL) |
| Sham组 | 15 | 186.42±21.53 | 73.54±8.02 | 1.91±0.21 |
| AMI组 | 15 | 501.34±51.22* | 179.68±19.15* | 4.88±0.55* |
| YGTY-L组 | 15 | 412.63±43.24# | 138.84±14.62# | 4.05±0.43# |
| YGTY-M组 | 15 | |||
| YGTY-H组 | 15 | |||
| CPT组 | 15 | |||
| YGTY-H+740 Y-P组 | 15 | 489.12±50.49∇ | 170.23±18.12∇ | 4.76±0.58∇ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较, |
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与Sham组比较，AMI组凋亡率及Bax蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达降低（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组凋亡率和Bax蛋白表达降低，Bcl-2蛋白表达升高（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组凋亡率及Bax蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达降低（P < 0.05），见图 3、图 4、表 5。
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| 注：Sham 组，假手术组；AMI 组，模型组；YGTY-L 组，YGTY 低剂量组；YGTY-M 组，YGTY 中剂量组；YGTY-H 组，YGTY 高剂量组；CPT 组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P 组，YGTY 高剂量+ 图 3 各组大鼠TUNEL染色图（×200） Fig. 3 TUNEL staining images of rats in each group (×200) |
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| 注：A，假手术组；B，模型组；C，YGTY低剂量组；D，YGTY中剂量组；E，YGTY高剂量组；F，卡托普利组；G，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。 图 4 各组大鼠凋亡相关蛋白表达图 Fig. 4 Expression diagram of apoptosis-related proteins of rats in each group |
| 组别 | 动物数 | 凋亡率(%) | Bcl-2 | Bax |
| Sham组 | 5 | 3.12±0.32 | 0.92±0.11 | 0.34±0.04 |
| AMI组 | 5 | 35.41±3.62* | 0.23±0.02* | 0.93±0.09* |
| YGTY-L组 | 5 | 27.69±2.83# | 0.45±0.04# | 0.78±0.08# |
| YGTY-M组 | 5 | 18.38±1.54#△ | 0.61±0.06#△ | 0.62±0.07#△ |
| YGTY-H组 | 5 | 10.15±1.03#△▲ | 0.73±0.07#△▲ | 0.45±0.05#△▲ |
| CPT组 | 5 | 9.86±1.02#△▲ | 0.76±0.08#△▲ | 0.42±0.04#△▲ |
| YGTY-H+740Y-P组 | 5 | 33.98±3.25▽ | 0.30±0.03▽ | 0.88±0.08▽ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | ||||
与Sham组比较，AMI组中性粒细胞（MPO标记）和巨噬细胞（CD68标记）浸润数量增加，ICAM-1、C5a、MMP-9、IL-1β、IL-6、TNF-α水平上升（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组中性粒细胞（MPO标记）和巨噬细胞（CD68标记）浸润数量减少，ICAM-1、C5a、MMP-9、IL-1β、IL-6、TNF-α水平下降（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组中性粒细胞（MPO标记）和巨噬细胞（CD68标记）浸润数量增加，ICAM-1、C5a、MMP-9、IL-1β、IL-6、TNF-α水平上升（P < 0.05），见图 5、表 6、表 7。
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| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。 图 5 各组大鼠MPO、CD68免疫组化图（×200） Fig. 5 Immunohistochemical staining maps of MPO and CD68 of rats in each group (×200) |
| % | |||||||||||||||||||||||||||||
| 组别 | 动物数 | MPO阳性率 | CD68阳性率 | ||||||||||||||||||||||||||
| Sham组 | 5 | 0.16±0.02 | 0.29±0.03 | ||||||||||||||||||||||||||
| AMI组 | 5 | 3.21±0.35* | 5.84±0.56* | ||||||||||||||||||||||||||
| YGTY-L组 | 5 | 2.45±0.27# | 4.31±0.45# | ||||||||||||||||||||||||||
| YGTY-M组 | 5 | 1.73±0.19#△ | 2.95±0.31#△ | ||||||||||||||||||||||||||
| YGTY-H组 | 5 | 0.95±0.11#△▲ | 1.18±0.11#△▲ | ||||||||||||||||||||||||||
| CPT组 | 5 | 0.89±0.09#△▲ | 1.12±0.10#△▲ | ||||||||||||||||||||||||||
| YGTY-H+740 Y-P组 | 5 | 3.09±0.36▽ | 5.67±0.55▽ | ||||||||||||||||||||||||||
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | |||||||||||||||||||||||||||||
| 组别 | 动物数 | ICAM-1(pg/g) | C5a(ng/g) | MMP-9(ng/g) | IL-1β(pg/g) | IL-6(pg/g) | TNF-α(pg/g) |
| Sham组 | 5 | 4 612.58±289.62 | 235.46±16.78 | 106.81± 7.52 | 4 832.58±226.48 | 43.16±3.52 | 786.12± 50.34 |
| AMI组 | 5 | 7 735.49±371.35* | 497.65±50.14* | 170.26±10.15* | 7 102.64±302.34* | 81.29±5.68* | 1 326.78±100.25* |
| YGTY-L组 | 5 | 6 915.36±332.48# | 420.73±38.75# | 151.68± 8.89# | 6 416.25±331.36# | 70.12±5.83# | 1 136.49± 89.16# |
| YGTY-M组 | 5 | 6 083.94±386.74#△ | 343.51±32.16#△ | 132.28± 9.16#△ | 5 732.48±239.27#△ | 59.34±5.01#△ | 971.46± 73.48#△ |
| YGTY-H组 | 5 | 5 276.38±312.11#△▲ | 268.16±24.38#△▲ | 113.42± 7.03#△▲ | 5 106.74±192.35#△▲ | 48.11±3.86#△▲ | 806.39± 58.74#△▲ |
| CPT组 | 5 | 5 168.43±306.28#△▲ | 266.49±23.57#△▲ | 112.15± 6.85#△▲ | 5 033.15±289.12#△▲ | 46.28±3.72#△▲ | 802.41± 61.22#△▲ |
| YGTY-H+740 Y-P组 | 5 | 7 593.15±476.58▽ | 473.94±43.25▽ | 161.95±10.64▽ | 6 986.76±364.31▽ | 77.15±5.32▽ | 1 268.55± 98.69▽ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | |||||||
与Sham组比较，AMI组SOD水平下降，MDA和ROS水平上升（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组SOD水平上升，MDA和ROS水平下降（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组SOD水平下降，MDA和ROS水平上升（P < 0.05），见图 6、表 8。
|
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。 图 6 各组大鼠DHE染色图（×200） Fig. 6 DHE staining images of rats in each group (×200) |
| 组别 | 动物数 | SOD(U/mgprot) | MDA(nmol/mgprot) | ROS相对荧光强度(%) |
| Sham组 | 5 | 273.48±25.16 | 4.01±0.38 | 3.69±0.38 |
| AMI组 | 5 | 139.62±13.48* | 8.86±0.72* | 38.96±4.01* |
| YGTY-L组 | 5 | 180.79±16.54# | 7.52±0.63# | 29.49±3.56# |
| YGTY-M组 | 5 | 223.51±17.68#△ | 6.19±0.49#△ | 20.96±2.71#△ |
| YGTY-H组 | 5 | 263.93±21.16#△▲ | 4.93±0.41#△▲ | 11.08±1.15#△▲ |
| CPT组 | 5 | 266.53±20.55#△▲ | 4.89±0.45#△▲ | 10.23±1.06#△▲ |
| YGTY-H+740Y-P组 | 5 | 189.43±15.24▽ | 8.01±0.75▽ | 37.12±3.95▽ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | ||||
与Sham组比较，AMI组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平上升（P < 0.05）；与AMI组比较，YGTY-L组、YGTY-M组、YGTY-H组及CPT组pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平下降（P < 0.05）；与YGTY-H组比较，YGTY-H+740 Y-P组Sp-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平上升（P < 0.05），见图 7、表 9。
|
| 注：A，假手术组；B，模型组；C，YGTY低剂量组；D，YGTY中剂量组；E，YGTY高剂量组；F，卡托普利组；G，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。 图 7 各组大鼠通路相关蛋白表达图 Fig. 7 Expression map of pathway-related proteins of rats in each group |
| 组别 | 动物数 | p-PI3K/PI3K | p-AKT/AKT |
| Sham组 | 5 | 0.36±0.04 | 0.31±0.03 |
| AMI组 | 5 | 0.68±0.05* | 0.61±0.06* |
| YGTY-L组 | 5 | 0.59±0.04# | 0.52±0.04# |
| YGTY-M组 | 5 | ||
| YGTY-H组 | 5 | ||
| CPT组 | 5 | ||
| YGTY-H+740 Y-P组 | 5 | 0.65±0.04∇ | 0.58±0.06∇ |
| 注：Sham组，假手术组；AMI组，模型组；YGTY-L组，YGTY低剂量组；YGTY-M组，YGTY中剂量组；YGTY-H组，YGTY高剂量组；CPT组，卡托普利组；YGTY-H+740 Y-P组，YGTY高剂量+ PI3K激活剂组。与Sham组比较，*P < 0.05；与AMI组比较，#P < 0.05；与YGTY-L组比较，△P < 0.05；与YGTY-M组比较，▲P < 0.05；与YGTY-H组比较，▽P < 0.05。 | |||
心肌梗死是导致心血管疾病死亡的主要原因之一 [17]。尽管及时恢复血流再灌注是治疗AMI的关键措施，但再灌注过程本身可能引发氧自由基爆发性生成及心肌细胞凋亡，从而加重心肌损伤，这些病理过程涉及复杂的细胞内信号网络调控 [18]。YGTY作为临床常用于治疗心绞痛与心肌梗死的传统方剂 [19-20]，其具体作用机制尚待深入阐明。
本研究系统评估了YGTY对AMI大鼠的多方面保护效应。在心脏功能与结构层面，AMI导致大鼠LVEDD与LVESD显著增加，LVEF与LVFS急剧下降，与既往研究 [21]一致，提示心脏泵功能受损及病理性重构，YGTY干预则有效逆转上述心功能指标，并显著降低心肌梗死面积及血清心肌损伤标志物（cTnI、cTnT及CK-MB）水平，从器官功能与分子标志两个维度证实了其心肌保护作用。在明确整体心功能改善的基础上，本研究进一步从细胞层面探究其保护机制。细胞凋亡是AMI后心肌细胞死亡的重要途径 [22]。本研究显示，AMI模型组心肌细胞凋亡率显著升高，且促凋亡蛋白Bax表达上调，而抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调。YGTY治疗则有效逆转了这一蛋白表达失衡，降低了细胞凋亡率。这表明，调控Bcl-2/Bax比值，进而抑制线粒体凋亡通路，是YGTY发挥心肌保护作用的关键机制之一。
除细胞凋亡外，炎症反应也是加剧心肌损伤的关键环节。在心肌损伤的病理进程中，大量趋化因子的释放会迅速募集中性粒细胞与巨噬细胞至损伤区域，其中中性粒细胞被视为炎症反应的第一响应者 [23]。MPO和CD68分别是中性粒细胞和巨噬细胞的主要表面标志物 [24]。本研究的免疫组化染色显示，AMI后中性粒细胞标志物MPO与巨噬细胞标志物CD68的表达均显著上升，提示两类炎症细胞大量浸润；而经YGTY干预后，其表达明显受到抑制。进一步检测发现，YGTY能够显著降低心肌组织中关键趋化因子ICAM-1、C5a及MMP-9的水平。结果提示，YGTY可能通过抑制趋化因子的表达与释放，削弱其对炎症细胞的招募能力，从而减轻心肌局部的炎症细胞浸润。为深入评估YGTY对炎症反应的调控作用，本研究还检测了3种核心炎症介质IL-1β、IL-6与TNF-α的表达水平。IL-1β与IL-6作为典型的促炎细胞因子，已被证实参与心肌损伤过程 [25]；TNF-α则是巨噬细胞活化后产生的重要促炎介质，在炎症级联放大中起关键作用 [26]。实验结果显示，YGTY能显著降低上述炎症介质的表达，表明其不仅抑制炎症细胞的趋化与浸润，更能从分子层面抑制促炎介质的释放，从而多环节、多层次地缓解AMI后的炎症反应。
值得注意的是，氧化应激与炎症反应相互交织，共同推动心肌损伤进程 [27]。ROS的过量产生是氧化应激的重要因素，氧化应激在AMI的发病机制中起着关键作用 [28]。细胞氧化损伤的程度可以通过脂质过氧化最终产物MDA的含量来反映。SOD是一种重要的抗氧化酶，能抑制自由基的产生并维持代谢平衡 [29]。然而，ROS的过度产生会消耗SOD，破坏氧化-抗氧化平衡，并引发氧化应激损伤和细胞凋亡 [30]。本研究表明，YGTY处理可以有效提升心肌组织中的SOD水平，降低ROS水平，并抑制MDA的产生。这些发现表明，YGTY可能通过增强心肌组织的抗氧化能力，减轻AMI引起的心肌损伤。
在上述机制的基础上，本研究进一步深入探讨其上游信号通路调控机制。AMI的发生发展与多条信号通路的异常调控密切相关，包括cAMP/PKA、TLR4/NF-κB p65等通路的激活，以及Sirt3等通路的抑制 [1，31-32]。其中，PI3K/AKT通路磷酸化水平的升高是其典型特征之一，而抑制该通路的过度激活已被证实可有效缓解心肌损伤 [33]。本研究发现，AMI后心肌组织p-PI3K/PI3K与p-AKT/AKT比值显著升高，与既往研究 [16]一致，进一步印证了PI3K/AKT通路在AMI病理状态下的异常活化。而YGTY治疗后，上述通路关键蛋白的磷酸化水平明显受到抑制。在使用PI3K特异性激活剂740 Y-P进行联合干预后，YGTY-H组在改善心功能、减少梗死面积、抑制细胞凋亡、减轻炎症及氧化应激等方面的有益效应均被不同程度地逆转。该“激动剂挽救实验”结果为YGTY通过抑制PI3K/AKT通路活化发挥心肌保护作用提供了关键的机制性证据。
基于上述“激动剂挽救实验”提供的直接证据，本研究发现抑制PI3K/AKT通路可能是YGTY发挥保护作用的关键机制。本研究关于“抑制PI3K/AKT通路产生保护作用”的结论，与经典研究中“激活该通路以发挥急性心肌保护”的普遍认知形成了互补。在经典的急性缺血/再灌注模型中，迅速、短暂地激活PI3K/AKT通路是抵抗即刻细胞凋亡的关键生存信号。在本研究模拟的永久性闭塞所致慢性心肌梗死及心室重构阶段，持续数周的病理刺激可能导致该通路陷入一种“失调性过度激活”状态。此时，其功能可能发生“时相性转变”，从促进细胞存活转向可能参与维持慢性炎症、氧化应激或不良重构 [16]。因此，YGTY的“抑制”作用，更准确地理解是对这一慢性病理背景下异常信号稳态的“纠正”或“正常化”调节。这揭示了PI3K/AKT通路的功能可能具有高度的“环境依赖性”与“阶段特异性”，提示针对该通路的治疗策略需精确对应疾病的不同进程。
综上，YGTY可能通过抑制PI3K/AKT信号通路，改善心功能、减少心肌梗死、抑制细胞凋亡、缓解炎症浸润与氧化应激，进而减轻AMI大鼠心肌损伤。本研究为YGTY的临床应用提供了实验依据与机制支持。
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